By Tingting, 18 August, 2024
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【感兴趣做实验的同学可以看看】

1 供试菌株为尖孢镰刀菌,由课题组内周展华师姐提供,储存于4℃冰箱。

2 培养基配置

2.1 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA):46g加入1000mL蒸馏水中,115℃高压灭菌20 min.

2.2 马铃薯葡萄糖水(PDW):26g加入1000mL水中,121℃高压灭菌15min。

【注意事项,PDA和PDW配完后需要灭菌才可使用。PDA为固体培养基,需及时倒板,用来继代菌株。】

3 菌种培养

将菌种采用PDA固体培养基培养,置于25℃恒温培养箱内培养7-10d,待菌丝长满后,取培养基上的菌丝,置于PDW液体培养基培养,并放入摇床内培养7d,摇床温度设置28℃,转速设置为150-200r/min。

【注意事项,需要将PDW放凉后才能进行接菌,温度太高,菌会失活。

菌种培养需要在超净工作台进行操作,所使用的枪头、培养皿等需灭菌,且在超净工作台中才能打开。】

4 孢子悬浮液配置

使用擦镜纸进行过滤,加入灭菌水冲洗两次。过滤完后,离心6min,转速5000rpm,离心后,倒掉上清液。接着,使用细胞计数板和显微镜,将溶液浓度稀释到1×107 个/mL。

【注意事项,过滤时,擦镜纸上会残留孢子和菌丝,用水冲洗要轻,不能将擦镜纸戳破,不然会有杂质进入到孢子液中;可在过滤时,使用小漏斗进行辅助。

细胞计数板是16×25块,使用的汤麦式计数,数四角以及中央中方格内的孢子。其中,孢子一半以上在方格内的则计入,其余不计。通过计算,得到最后的孢子悬浮液。】

计算公式如下: