1、测RNA浓度：
OD值较高，比较好。
A260/280在1.9-2.1之间，说明RNA纯度较好；小于1.9，说明蛋白质残留；大于2.1，说明RNA讲解或者DNA残留，可以跑胶看看。
A260/230大于2.0较好；小于2.0，说明盐离子，可能是RNA中有机试剂残留。
2、反转录为cDNA
用诺唯赞的反转录试剂盒，进行反转录得到模版后，进行稀释；
3、检验引物的特异性
(1)普通PCR
可以使用10μL的体系，30个循环即可。目的是节约模版和mix酶。
体系如下：
F 0.5 μL
R 0.5μL
cDNA 1μL
ddH2O 3μL
Mix 5μL
(2)跑胶
PCR片段小于200bp，制1.2%-1.5%的胶；大于500bp，制0.8%-1%的胶。
设置130V，跑30分钟。
根据胶图检查引物是否是特异性表达，如果不是，可以考虑重新设计引物。
4、荧光定量实验
注：荧光定量的酶需要避光。
首先，计算好试剂的用量，多计算10%的量，因为实验过程中会有损耗。将模版和水进行混合，引物和酶进行混合。
（注：千万不要将模版和酶进行混合，不然会影响酶。）
接着，在定量板上先标注好基因，防止点错孔。先点模版和水的混合液，在点引物和酶的混合液。
接着，使用离心机，离心3-5分钟，充分混合。
最后，上机。上机程序需要根据试剂公司提供的说明书来设置。
5、荧光定量结果解读
Ct值在20-30之间，定量分析最准确；
Ct值小于10，需要稀释模板后，重新进行实验；
Ct值在30-35之间，需要提高模板浓度或增大反应体积，以提高扩增效率；
Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量。