打前准备:
- 小摇:1mlLB(加K+、rif)+100ul甘油菌,按照1:10的比例,摇12h,28度
- 大摇:20mlLB(加K+、rif)+2ml小摇产物
- 6000转,8min离心,去液体
- 配置悬浮液:(注意和大孢子的不一样)500ml重悬液体系:0.25g吗啉乙磺酸;25g蔗糖;1/2MS Base Salts按瓶子上写的加,配好后调PH到5.8再加辅助转化试剂:10ml加4ul
- 然后加入和大摇一样量的悬浮液,如果菌不多应该少倒一点
- 测OD600值:0.8
- 如若OD值较小则进行刮板,将菌刮下来,如果板子在超净台外打开的话就不能用了,所以尽量涂板的时候涂两个以备用;如果OD值较大的话应加入悬浮液
- 调到一定值就可以打了
- 为避免前期小摇大摇没有摇起来,应在其同时进行涂板,涂板和小摇大摇时间一样,所以同时进行即可,这样即使没有摇起来菌也可以进行刮板,1300应多准备
- 工具的准备:标签,笔,针头,针管,手套,板架
打时
- 找一致性较好的打,打两叉的,不要打三叉的
- 标签标好哪个是CKOE
- 注射时,应注射至冒出液体
摘后处理
1.一组实验需要拍三张照片,先拍一个有树杈的照片
2.再拍一个把小孢子剥下来的,为方便后续程序识别准确应将小孢子摆正,标准可以为垂直于尺子或卡片
3.第三张:把鳞片剥下来的,为方便后续程序识别准确应将小孢子摆正,标准可以为垂直于尺子或卡片
4.然后将小孢子分别放进对应试管内,放液氮后保存至-80度冰箱
5.如果需要做石蜡切片应提前取出3-6组表型较明显的小孢子
【金山文档 | WPS云文档】 打小孢子参考流程
https://kdocs.cn/l/cdQFAtYNrmNo