1. 点击左上角的file，把基因的cds序列粘贴进去。

1. 然后点击左上方的的Primer字样，点击左上方的Search 。

1. 弹出新的对话框对所设计的引物进行条件设置，引物扩增出的产物长度设置一般为150bp-200bp，引物的长度一般为20bp加减2bp，然后点击左下方的OK，然后再点击新对话框的OK

1. 会出现很多对定量引物，右边可以进行选择不同位置的引物，以左下方出现红色的found最少为最好的引物，尽量选择没有红色found的引物。

1. 上方的S/A中的S是上游（F）引物，点击Edit primer，把引物粘贴下来即可，A就是下游（R）引物。

【金山文档 | WPS云文档】 primer5设计qPCR引物
https://www.kdocs.cn/l/cfiVq3cXeCD1