By shenyijun, 31 December, 2025
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【金山文档 | WPS云文档】 当你需要对样本表面进行宏基因组测序送测,该怎样制作样品? https://www.kdocs.cn/l/chlwrGo0NEkq

当你恰好采集了一批样本,又恰好需要需要对其表面微生物进行测序分析,样品该怎样制作呢?

本次实验需要用到无菌PBS溶液(提前购买,6个样至少需要三瓶)、锥形瓶、摇床、超声波水浴、针管和0.2μm滤膜。

本文以香榧果实为例

1.采集样本时注意。感病的样本和作为对照组的正常样本要分开采集,不要混样,以免造成影响。

 

2.将采集的香榧果实分好组,我制作了病变组3个和对照组3个,命名BB-1,BB-2,BB-3和DZ-1,DZ-2,DZ-3,将样本放入锥形瓶,贴上标签区分好。

 

3.倒入无菌PBS溶液,理论上要浸没样品,但是太费溶液了,就适量就好。放入摇床180rpm孵育20min。收集溶液到另外的容器,注意收集的时候6个样品还是要分开收集。

 

4.再次倒入适量无菌PBS溶液,放入摇床180rpm孵育20min,收集溶液,可以跟上次的同组的溶液在一起。

 

5.再次倒入适量无菌PBS溶液,超声波洗涤10min,参数要求功率160w,每启动30s停止30s(做不到的话就1min或者2min),再次收集溶液。

 

6.针管吸取溶液,并过0.2μm滤膜,最后收集的滤膜就是送测样品,放入-80冰箱保存,不同组用不同分装袋,并用记号笔标注代号。

👋

要点注意:

  1. 最终收集的溶液会很多,而一个滤膜过滤几次就卡的过不动了,一个样品组可以用多个滤膜,收集在一起,而且多多益善。

     2.尤其注意对照组,尽可能多过几个滤膜,因为对照组表面微生物本来就不如病变组丰富,做少了极可能导致后期样品质检不合格,不能上机(切身体会)。