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1：将目的质粒(Plasmid)置于冰上融化。从-80°C冰箱中取出农杆菌感受态细胞，迅速插入冰盒中，让其缓慢融化（约5-10分钟），全程保持低温。

2：在无菌环境中，向一管50ul的农杆菌感受态细胞悬液中，加入3-4 μL的质粒DNA，冰上静置5分钟。

3：将离心管迅速放入液氮中，静置5分钟。

4：快速将离心管从液氮中取出，立即转入37°C水浴锅中，静置5分钟。此步骤切换要快，以产生剧烈温差。

5：向管中加入400ul的无抗生素（Antibiotic）的LB液体培养基（超净台中进行）

6：将管子置于28°C摇床(408靠近门口那台摇床）中，温和振荡培养2-4小时，使细菌复苏并表达抗性基因。

7：用移液枪枪头将全菌液均匀涂布在含有卡那霉素（Kanamycin）和利福平抗生素（Rifampicin）的LB固体培养基上。

8：将平板倒置，放入28°C培养箱中（406通风橱旁边的靠下面的那台培养箱），避光培养36-48小时，直至出现单菌落（如图）。