https://www.kdocs.cn/l/csvzTSKIBizQ
一、实验前准备
RNA样品准备：用存放在负八十的RNA（需要一直放在冰上，用完及时放回负八十）
试剂准备：用的是诺唯赞的反转录试剂盒（有俩种，现在新款的反转录出来的cdna可以用于pcr，也可用于qpcr，但是操作步骤不一样，试剂也有一点区别的，务必先看清楚)，使用无RNase的八联管
二、反转录反应步骤（以20μL体系为例）
最开始我们需要将八联管的标记清楚，建议是先将样品顺序排好，然后再根据样品顺序来写八联管的标记，管子标记是写在盖子上的，所以最好核对几遍再加试剂。
首先根据我们测得RNA的浓度值，拿1000除以浓度值得到的值大小就是我们在该体系中加入的rna模版含量，假设算出来为A
那么这一管我们需要加的RNase-free ddH₂O的含量就是拿12-A得到的
其次，还有加入4μL的4× gDNA Eraser Mix。
所以，这步需要提前计算好，先把rna量和对应的水量全部在纸上计算出来，再挨个对应加进去，因为每个值和样品都不同，所以几乎每加一次都需要调移液枪和换枪头。
轻轻混匀，42℃孵育2分钟以去除基因组DNA污染。
随后在上述反应管中加入以下组分4μL的5× RT Mix，轻轻吹打混匀，小离心机短暂离心收集液体。
根据引物和模板类型设置PCR仪程序：37℃孵育15分钟。再85℃加热5秒以终止反应。
三、反应后处理
反应结束后，将产物短暂离心，置于冰上冷却。合成的cDNA可直接用于后续qPCR。可置于-20℃保存
