https://www.kdocs.cn/l/ciLiDEMzev3T

实验方案：30 μL 单酶切体系（Hind III + Sal I）

1. 试剂准备

由于设计的是Hind III + Sal I这俩个酶切位点，所以需要准备这俩种对应的酶，同理，如果对应别的载体质粒是不同的酶切位点，都需要它对应的酶来做酶切。

然后依据已经提好的载体质粒，需要知晓你所用的质粒的浓度大小。

2：配置体系

酶1: 3ul

酶2: 3ul

buffer：3ul

质粒：1000/浓度

DD水：21ul-质粒用量

这里面的酶1和2就是对应俩种不同酶切位点的酶。然后又举个例子，比如我用的质粒浓度是256.4，则用量就是1000/256.4=3.9ul，则我的水用的就是21-3.9=17.1ul

3. 标准操作流程

首先取一个八联管，将上述配置体系全部加进去，注意要换枪头的，切勿交叉污染！

混匀：切勿剧烈涡旋。可短暂离心

孵育：置于 37°C 金属浴中，孵育 4-6小时（最长不要超过六小时，一般可以上午九点左右放，然后下午俩点可以过去拿出来接着跑胶验证。如果不马上跑胶，直接放 4°C 暂放。）

4. 跑胶验证建议

对照：取 3ul未酶切的质粒 + 3 μL 6× Loading Buffer 作为对照的上样

上样：其余的按照每个样5ul体系加入。

如果切开的条带，那么进行清洁回收