用有盖50ml离心管收集过夜培养的大肠杆菌，弃尽培养基。加入500ul已加入RNaseA的BufferⅠ，充分悬浮沉淀的细菌。

加入500ul BufferⅡ，温和并充分地翻转离心管4~6次。

加入700ml BufferⅢ，温和地翻转离心管直至溶液中的蓝色沉淀全部转变为淡黄色沉淀。

最高速(12000rpm)离心10分钟。

将核酸纯化柱置于2ml离心管中，吸取800ul上清液加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，12000rpm离心30秒。

弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入500ulBufferW1，盖上管盖，12000rpm离心30秒。

弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入700ulBuffer W2，盖上管盖，12000rpm离心30秒。重复一次

弃2ml离心管，将核酸纯化柱置于一个洁净的 1.5 ml离心管中，在纯化柱的膜中央加入 60~200 μlBufferE，盖上管盖，室温静置5分钟（要多晾一会儿，否则反应不充分），12000 rpm 离心30秒。

弃纯化柱，洗脱的质粒 DNA 可立即用于各种分子生物学实验;或者将质粒 DNA 储存于-20℃备用。