https://www.kdocs.cn/l/crfv1zof4D8X
用的是DNA胶回收与纯化试剂盒
其实整体最主要的就是加入液体,再离心,就是需要经历很多步。
详细操作流程
1:凝胶溶解与结合(关键控制点)
先取一个离心管,将切入的胶放入,再加入500ul的Buffer P(在众多瓶液体中呈黄色那瓶),再通过金属浴融化胶块。需要时澄清无杂质,流动丝滑。
2:DNA结合与初步离心
将混合液转移至核酸纯化柱中,盖紧管盖,12000 rpm离心30秒。
离心后,DNA被吸附于纯化柱的硅胶膜上,废液流入收集管
将纯化柱重新放回收集管中备用
3:第一次洗涤(去蛋白与色素)
向纯化柱膜中央加入700 μl Buffer WB,盖紧管盖,12000 rpm离心30秒。弃废液,重新将纯化柱放回收集管。(这个步骤的 Buffer WB必须预先加入无水乙醇,需要时混合过的,否则无法有效去除杂质。)
再重复操作一次,加700 μl Buffer WB,盖紧管盖,12000 rpm离心30秒。弃废液
4:高速空离(乙醇去除-最关键步骤)
12000 rpm离心2分钟,彻底去除膜表面和柱腔内残留的乙醇。
5:DNA洗脱
管位转换:
小心弃去2 ml收集管(避免触碰纯化柱膜),将纯化柱转移至一个洁净的1.5 ml离心管(此管用于收集最终产物,务必将标记做清楚。可能会保存很久来使用。)。
洗脱操作:
向纯化柱膜中央加入25-30μl Buffer TE,12000 rpm离心1分钟,DNA随液体流出至1.5 ml管底,此时可以将管底液体洗出重新打入纯化柱膜中央,再次12000 rpm离心1分钟,可提高小片段回收率