2. 材料与方法 本研究使用的香榧树种植在浙江省杭州市临安的香榧果园。在假种皮突出后30 d（约5月），对球果进行瞬时过表达实验。 2.2. 采用冻融法 将pCAMBIA1300-GFP空载体转化为农杆菌GV3101菌株。阳性克隆在含有50 mg/L卡那霉素和50 mg/L利福平的YEB液体培养基中培养，28℃，220 rpm摇培养至600 nm光密度（OD）为0.6。将细胞离心后重悬于农杆菌浸润缓冲液（10 mM MgCl2, 10 mM MES, 100 μM - tosyringone, pH 5.6）中，用1 mL超细针注射器将含有上述质粒的10 μL农杆菌细胞悬液注射到巨锥细胞中。通过分析液体注射培养基中细菌密度（0、0.1、0.3、0.6和0.9 OD600值）和孵育时间（0、3、6和9 d）等参数，探讨影响基因过表达瞬时转化效率的因素。每次实验大约使用50个锥体。 2.3. 切割注射了pCAMBIA1300-GFP的T. grandis锥体，轻轻置于载玻片上，立即用共聚焦激光扫描显微镜（LSM880，蔡司，德国）观察，激发波长为488 nm。为了进行亚细胞定位分析，我们将TgWRKY47的编码序列（CDS）（不包括停止密码子）整合到表达载体pCAMBIA1300-GFP中。

import os import pandas as pd import matplotlib.pyplot as plt import seaborn as sns from scipy.stats import mannwhitneyu from itertools import combinations import matplotlib sns.set_style("whitegrid") sns.set_palette("Set2") plt.rcParams['font.sans-serif'] = ['Arial Unicode MS', 'SimHei', 'Microsoft YaHei'] plt.rcParams['axes.unicode_minus'] = False file_path = r"E:\表型图片\5.16" fig_path = r"E:\表型图片\改进" if not os.path.exists(fig_path): os.makedirs(fig_path) def add_stat_annotation(ax, data, x_col, y_col): groups = data[x_col].unique() if len(groups) < 2: re

1.甘油菌小摇-大摇，这期间可将小摇or大摇产物抽出保菌 2.为了防止摇不起来菌，可以进行涂板后转板，然后将其挂到试管壁悬浮 3.重悬液：300ml的体系：6ml 0.5mol/L MES;600ul 0.1mol/L AS；3ml Mgcl2；290.4ml dd水（PH 5.6) 4.收集时间：在打完10天后 5.每对样品分对收，先拍照，再将其横切/纵切将里面的白色种仁挖出来到试管中，做好标记 6.对于表型明显的导入FAA固定液后期进行石蜡切片观察细胞大小

1.找一致性较好的膨大孢子，并写标签，挂标签 注：ａ．标签名称：基因名字—第几对—CK／OE—左／右／上／下＋日期＋自己名字 　　ｂ．并在大孢子上标CK／OE ２.打之前拍照 注：ａ．大孢子与标签平齐，并在一个平面上， 　　ｂ．CK和OE分别各一张，并使标签与相对性的大孢子靠近拍 ３.打之前将针头换成我们的黄色针头，并在针管壁上标好对应基因以免混搅 ４.针头对准大孢子尖端的突起位置进行注射，先将针头完全插入，然后沿注射进去的通路来回动一动后推溶液 ５.可以先打一下试试手，如果针头经常堵得话，可以专门用一个固定的针头先疏通一下，再沿 一样的位置打可能会好些 ６.建议一人找大孢子，挂标签，一人专门打，这样比较快，且为了尽可能的一致性，建议专门一人打，固定的搭配 ７.打的时候不要打进去太多，因为大孢子与小孢子不同，使密闭的空间，打的多了里面会砰的一声炸掉 ８.打完后记录树的编码以及基因和对数

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