连接转化： 1，10ul的体系：5×CEII Buffer 2ul,连接酶ExnaseII 1ul,回收片段4ul,线性克隆载体1ul,ddH2O 2ul,加完后37度30-40min. 2.10ul质粒＋33.3ulDH5，冰上轻混放30min，42度水浴90秒，立即冰上2-3分钟 3.加入无抗LB400ul摇50min 4.涂对应的抗性板37度，培养16h左右 转农杆： 1.先把感受态拿出来放冰上化 2.可以质粒里面加3ul的ddH2o,也可以不加 3，50ul感受态＋3ul质粒轻混，冰上5分钟，液氮5分钟，37度水浴5分钟，冰冷却5min，超净台400ul无抗LB，28度摇床2小时 4，涂K＋抗性LB板加200-300ul 5,28度培养箱2天 6，挑菌-菌检-制胶-看条带与基因长度是否相符 7，加甘油

1.取材拍照并标注编号。 2.固定：将材料放入5ml离心管中，倒入FAA固定液浸泡小孢子，固定2一3天。 3.脱水：配50%、70%、80%、90%、95%的酒精（1/2二甲苯1/2酒精:150ml二甲苯，150ml酒精-配300ml；95酒精:332.5ml酒精 17.5ml水 -直接配350ml;；90酒精:180ml酒精，20ml水-其余配200ml；80酒精:160ml酒精，40ml水-200ml；70酒精:140ml酒精，60ml水；50酒精:100ml酒精，100ml水）。80% ，90% ，95 % ，100% ，100% 各15min浸泡，再使用1/2二甲苯1/2酒精，纯二甲苯，纯二甲苯各1h｡ 4.直接在有二甲苯的2ml离心管中加入石蜡，加满，烘箱烘 5.用镊子将小孢子放入新的离心管中 6.融蜡：水浴锅60度左右，将融蜡后的液体倒入2ml含植物的离心管，水浴锅1小时，换管 7.包埋：倒入提前融好的石蜡，将材料放于模具中 8.切片：安装刀片，固定植物材料，调整距离与高度，开始切片，用镊子和毛刷调整，切到后放于热水中，调整温度，载玻片贴上沾起来，放到盒中。

空间转录组学（Spatial Transcriptomics）是一种新兴的高通量基因组学技术，它能够在组织切片中同时获取基因表达信息和细胞的空间位置信息。以下是空间转录组学包含的主要内容： 1. 技术原理 空间转录组学的核心在于通过高通量测序技术检测组织切片中的转录本（如mRNA、lncRNA、miRNA等），并结合空间位置信息，绘制基因表达的空间分布图。常见的技术包括： • 基于NGS技术的方法：如10X Genomics Visium技术，通过在载玻片上布置带有条形码的捕获区域，捕获组织切片中的mRNA并进行测序。 • 基于成像的方法：如原位测序（ISS）和原位杂交（ISH），通过成像探针直接在组织中检测转录本。 2. 实验流程 以10X Genomics Visium技术为例，实验流程包括： 1. 组织样本固定、速冻和包埋。 2. 切片后进行透化条件优化，以确保mRNA能够被有效捕获。 3. 在载玻片上进行cDNA合成、文库构建和高通量测序。 4. 数据分析时，根据每个捕获区域的条形码信息，将基因表达数据映射回组织切片中的原始位置。 3. 数据分析内容 • 细胞分群与注释：通过已知的marker基因或结合单细胞转录组数据进行细胞类型注释。 • 差异基因分析：识别不同空间区域或不同样本之间的差异表达基因。 • 基因网络与功能富集分析：构建基因调控网络，分析基因功能富集情况。

1.打之前拍照记录 2.上传网站 3.要找长得相似的,差异性大的不打 4. 打太小的可能变黄不长 5.打的时候可以先把针头插深一点再到浅处打，打到在其他地方冒出液体位置 6. 有的用眼睛看不出来，要摘回来统计 7.要多看，多统计 8.摘回来后要在几个小时内处理完毕，再剥小孢子时注意戴口罩手套，桌面酒精擦洗干净 9.需要后续进行其他实验的进行液氮处理，需要进行石蜡切片的放在有FAA溶液的试管里 10.标记的时候用反过来的左右进行标记