2. 材料与方法 本研究使用的香榧树种植在浙江省杭州市临安的香榧果园。在假种皮突出后30 d（约5月），对球果进行瞬时过表达实验。 2.2. 采用冻融法 将pCAMBIA1300-GFP空载体转化为农杆菌GV3101菌株。阳性克隆在含有50 mg/L卡那霉素和50 mg/L利福平的YEB液体培养基中培养，28℃，220 rpm摇培养至600 nm光密度（OD）为0.6。将细胞离心后重悬于农杆菌浸润缓冲液（10 mM MgCl2, 10 mM MES, 100 μM - tosyringone, pH 5.6）中，用1 mL超细针注射器将含有上述质粒的10 μL农杆菌细胞悬液注射到巨锥细胞中。通过分析液体注射培养基中细菌密度（0、0.1、0.3、0.6和0.9 OD600值）和孵育时间（0、3、6和9 d）等参数，探讨影响基因过表达瞬时转化效率的因素。每次实验大约使用50个锥体。 2.3. 切割注射了pCAMBIA1300-GFP的T. grandis锥体，轻轻置于载玻片上，立即用共聚焦激光扫描显微镜（LSM880，蔡司，德国）观察，激发波长为488 nm。为了进行亚细胞定位分析，我们将TgWRKY47的编码序列（CDS）（不包括停止密码子）整合到表达载体pCAMBIA1300-GFP中。

import os import pandas as pd import matplotlib.pyplot as plt import seaborn as sns from scipy.stats import mannwhitneyu from itertools import combinations import matplotlib sns.set_style("whitegrid") sns.set_palette("Set2") plt.rcParams['font.sans-serif'] = ['Arial Unicode MS', 'SimHei', 'Microsoft YaHei'] plt.rcParams['axes.unicode_minus'] = False file_path = r"E:\表型图片\5.16" fig_path = r"E:\表型图片\改进" if not os.path.exists(fig_path): os.makedirs(fig_path) def add_stat_annotation(ax, data, x_col, y_col): groups = data[x_col].unique() if len(groups) < 2: re